(Oostembrink, 1960)

- 5 grs de material vegetal

- Embudos de vidrio de 100 mm de diámetro

- Mangueritas de jebe de 8-15 cm de largo

- Clips

- Cubierta de plástico de 58 cm. de ancho y 1.5 m de alto para evitar que la llovizna salga fuera de la cubierta. La cubierta no debe tener techo por que en él puede concentrarse el agua y caer en gotas gruesas sobre los embudos.

- Soporte de metal de 45 cm de ancho y 40 cm. de alto (alcanza para 16 embudos).

- Bandeja de metal de 60 cm. de ancho y 4 cm de alto, conectado a un desague.

- Tamiz soporte (1 mm de tamaño de poro) de 8 cm de diámetro, 2.5 cm de profundidad, con 3 patitas.

- Boquilla asperjadora (Teejet)

- Cuchillo o tijeras.

Procedimientos:

Este método combina el embudo original de Baerman (1917) con el nebulizador de Seinhorst (1950). El equipo se prepara de la siguiente manera:

- Los embudos conectados con su manguerita, son depositados sobre el soporte de metal.

- Este es colocado sobre la bandeja de metal, en el interior de la cubierta de plástico.

- En el centro de los embudos se instala la boquilla asperjadora con una abertura cónica ¼ T x 0.040", 0.40 x 0.360" para que rocíe una llovizna fina a una presión porque los nemátodos pueden salir del embudo en el agua que rebalsa.

- En la parte superior de cada embudo, se coloca el tamiz soporte.

- Lave el material vegetal para que este libre de suelo y otros restos, córtelos en pedazos de 1 a 1.5 cm. Coloque estos pedazos sobre el tamiz soporte, cierre la manguerita con clip (asegure que esté bien cerrada) y accione la boquilla asperjadora. Es importante que la superficie del agua, contenida en los embudos, no esté en contacto con el tamiz soporte debiendo existir una separación de ½ cm.

- Los nemátodos emergen del material vegetal pasan a través del tamiz y sedimentan en la parte del embudo, mientras que el exceso de agua cae por los bordes del embudo hacia la bandeja. Esto mantiene oxigenada el agua del embudo y se evita la muerte de nemátodos por falta de aireación, como se produce en el método original de Baerman.

- Los nemátodos pueden ser colectados cada 24 horas, abriendo el clip y recolectando 25 ml de agua contenida en el embudo. Para trabajos de diagnosis, al cabo de 6 días puede terminarse la extracción.

Para extraer principalmente hembras adultas ensanchadas de raíces.

1. Colocar 15 gr. de raíces frescas en una licuadora. Agregar 20 ml. de hipoclorito de sodio al 10% e incrementar el volumen a 200 ml. agregando agua de caño. Licuar por 30 segundos, lavar las paredes de la licuadora y liccuar por 30 segundos más.

2. Verter la suspensión sobre 2 tamices, en la parte de arriba 1 tamiz de 100 mesh y en la parte de abajo un tamiz de 400 mesh. Enjuagar los 2 tamices. Descartar lo que quedó en el tamiz de l00 mesh y colectar el material que quedó en el tamiz de 400 mesh en un vaso de vidrio.

3. Teñir la muestra con fucsina ácida (agregar 1 gota de fucsina ácida por cada 10 ml. de la suspensión).

4. Colocar la muestra en un horno microondas y calentar por 5 minutos.

5. Contar el número de hembras y otros estados en el estereoscopio.

 

 

 

Meloidogyne no forma quistes sino nódulos y deposita sus huevos en una masa gelatinosa ubicada en la parte posterior de su cuerpo.

Se ha descubierto que la lejía o hipoclorito de sodio diluye la mas que cubre a los huevos, por lo cual se debe tener cuidado con el tiempo de exposición que no debe ser mayor de 4 minutos para evitar su desintegración completa.

Se recomienda usar :

- Solución de lejía al 0.5% : Cuando se quiere obtener nemátodos vivos

- Solución de lejía al 1% : Cuando se quiere obtener nemátodos muertos, útil para el conteo.

Para la obtención de los huevos se procede de la siguiente manera :

a. Colocar en un vaso cerrado 5 gr. de raíces mas solución de lejía al 0.5% en cantidad suficiente que cubra a todo el tejido vegetal luego proceder a taparlo y agitarlo por tres minutos .

b. Luego se disponen dos tamices de 180 y 38 u de arriba hacia abajo respectivamente. se vierten las raíces lavadas con lejía y se procede a lavarlas con abundante agua.

c. Seguidamente los huevos retenidos en el tamiz de 38 u se juntan a un lado con el agua de la pizeta y se vacea a un vaso, se lleva a una solución de 100 ml , se homogeniza la solución con el burbujeador y se saca a placas petri dos alicuotas de 10 ml. cada una.

d. Finalmente se procede al conteo con la ayuda del contómetro, y se determina el numero de huevos por planta y el número de huevos por gramo de raíz.

II. TAXONOMÍA

Mononchido: Estoma ensanchado.

Sin superposición del esófago.

Dorylaimidos: Rayita negra (estoma).

Sin superposición

Trichodoridos: Onchioestilete (rayita curvada).

Cuerpo cilindrico.

Sin superposición.

Rhabditidos: Varían en cuanto a longitud y grosor.

Sin superposición.

No se ve el estoma cilíndrico.

Se observa un puntito negro cerca del final del esófago.

Tylenchido: Estomatoestilete.

Rayita bien negrita con un puntito en la base.

Con o sin superposición.

Tylenchidos

Dorylaimidos

Mononchidos

Rhabditidos