Fenwick (1940), Oostembrink (1950).

En este método como en el de Baunacke, es necesario hacer secar la tierra con quistes para que los quistes secos, floten en el agua, mientras que las partículas de suelo sedimenten. La separación de los quistes del suelo, usando el principio de flotación se puede lograr de varias maneras, pero a continuación se indican algunos materiales y procedimientos que pueden ser usados.

MATERIALES:

- 100 cc de suelo

- Equipo de Fenwick modificado: Este equipo consiste en un embudo colocado sobre una especie de jarra. El embudo tiene en la base de su parte ensanchada un tamiz de 1 mm de tamaño de poro. La jarra tiene forma trapezoidal, en su parte superior presenta los soportes del embudo y una aleta inclinada que bordea la jarra como collar, pero que termina en un solo conducto. La jarra en su parte inferior tiene un tapón que se retira para enjuagarla y limpiarla.

- Tamiz de 175 um de tamaño de poro

- Embudo de más o menos 10 cm de diámetro

- Embudo de 15 cm de diámetro

- Papel filtro o papel facial

- Erlenmeyers de 500 ml de capacidad

- Fiolas de 250 ml de capacidad

- Placas Petri

1. Coloque los 100 cc de suelo seco sobre el tamiz del embudo de equipo de Fenwick y coloque el tamiz de 175 um para recibir lo que rebalsa de la jarra.

2. Lave el suelo colocado en el tamiz del embudo, hasta que solo queden retenidas piedras, restos de raíces y material orgánico. Las partículas pesadas del suelo se van depositando en la base inclinada y la parte inferior de la jarra. Algunas partículas pequeñas de suelo, quistes y restos orgánicos flotan, rebalsan, salen a través de la aleta de la jarra y se depositan en el tamiz de 175 um (sí espera encontrar especies de quistes pequeños, puede usar un tamiz de menor tamaño de poro). Las partículas menores de 175 um y agua pasan a través del tamiz. Los quistes y restos orgánicos quedan retenidos en el tamiz. Retire el tapón de la parte inferior de la jarra para desaguarla y deje limpio el equipo.

3. Coloque un pedazo de 10 x 10 cm de tela calada (tul fino) sobre un círculo de metal y malla metálica, soldados a la parte superior de un soporte de metal.

4. Los quistes y material orgánico que quedaron en el tamiz de 175 um concéntrelos en un solo lado del tamiz y con una pizeta y un embudo transfiéralos a un erlenmeyer de 500 ml. Los quistes y restos orgánicos flotan, algunos restos orgánicos y partículas de suelo sedimentan. Decante la suspensión del Erlenmeyer sobre la tela del soporte de metal (paso 3).

5. Los quistes y restos orgánicos quedan retenidos en la tela, el agua pasa a través de la tela. Doble los bordes de la tela, asegúrelos con un clip y puede hacerlos secar a temperatura ambiente o con un desecador. En lugar de tela calada también se puede utilizar papel filtro colocado dentro de un embudo, los quistes que están en el Erlenmeyer de 500 ml se hacen pasar por el embudo quedando retenidos en le papel filtro. Con cuidado se dobla el papel, se coloca un clip y se pone a secar.

6. Luego de secado la tela calada o el papel filtro, se puede observar al estereoscopio, pero esta muestra aún tendrá gran cantidad de restos orgánicos que dificultaran el contaje.

MÉTODO DE LA ACETONA

Materiales

- Fiola de 250 ml.

- Acetona

- Embudos y Beakers

- Papel filtro

Procedimiento

1. Cuando los quistes y restos orgánicos estén secos, se puede usar el mismo principio del método para separarlos, es decir hacer flotar los quistes y sedimentar los restos orgánicos. Para esto se transfieren los quistes, con la ayuda de un embudo, a la fiola de 250 ml.(puede utilizarse un embudo para que esta operación sea más fácil). Llene hasta la mitad de la fiola, el líquido más denso como por ejemplo acetona; para que los quistes floten con más facilidad. Agite la fiola para que los quistes se separen de los restos orgánicos, llene con el líquido usado, fasta 1 ó 2 cm del borde superior de la fiola. La mayoría de restos orgánicos se depositan en la parte inferior de la fiola, los quistes y algunos restos orgánicos afloran y se sitúan en la superficie del líquido.

2. Si usa acetona en la separación de quistes, puede realizar las siguientes operaciones para recuperar la acetona. Coloque un embudo sobre el Biker de 500 ml y un papel filtro enrollado en forma de cono dentro del embudo, (el papel filtro puede estar rayado en cuadros). Decante los quistes y restos orgánicos que están en la superficie de la acetona, haciendo rotar la fiola para que no retenga quistes. Los quistes quedan retenidos en el papel filtro y la acetona pasará al frasco. Cuando no queden quistes en la fiola, agite, haga rotar la fiola y decante los restos orgánicos sobre un embudo de mayor diámetro, que contenga papel facial y que este colocado sobre un frasco de 2 a 5 litros. Los restos orgánicos quedan retenidos en el filtro y la acetona se recupera en el frasco. Para facilitar esta operación y analizar muestras en serie se puede instalar una batería de embudos:

1.Recipiente con acetona y una abertura en su parte inferior, conectado a una manguera de plástico que se abre o cierra con un clip.

2.Batería de embudos para retener los quistes y dejar pasar acetona.

3.Embudo de mayor diámetro para retener los residuos orgánicos y dejar pasar acetona.

4.Recipiente igual al Nº 1 para recolectar acetona.

5.Mesa para colocar la fiola y embudos a usarse para hacer flotar los quistes en acetona.

6.Cuando la acetona del papel filtro del embudo se haya evaporado, retire el papel filtro y colóquelo en una placa Petri. Observe bajo el microscopio de disección. Si el papel filtro esta rayado en cuadros, le facilitará el contaje de número de quistes (use iluminación de arriba hacia abajo). Cuando el número y restos orgánicos es demasiado se puede contar por partes.

7.Para separar los restos orgánicos y aún quedan los quistes, puede hacerlos rodar a través de una hoja de papel. Los quistes ruedan y los restos orgánicos quedan en el papel.

 

Materiales:

- Quistes

- Homogenizador de HUIJSMAN

- Plaquitas de contaje

- Estereoscopio

Procedimiento:

El contaje de quistes debe efectuarse eliminando los quistes formados de hembras que no han completado su desarrollo y que generalmente son más claros y muy pequeños.

1. Contaje de quistes:

Una vez obtenidos los quistes por el método de la acetona o por el método del papel , se colocaran estos en una placa de conteo , se llevaran al estereoscopio y se procederá a su contaje con la ayuda del contómetro.

2. Contaje de huevos:

Para realizar el contaje de los huevos. Se dispondrá de quistes y se procederá de la siguiente manera:

a) Coger 20 quistes , colocarlos en el homogenizador de HUIJSMAN y proceder a triturarlos .

b.) LLevar la muestra triturada a una solución de 100 ml agregándole agua

c) Homogenizar la solucion con el burbujeador y extraer una alicuota de 10 ml colocarla en una plaquita Petri rayada para contaje y llevarla al microscopio.

d) Realizar e conteo con la ayuda del estereoscopio.

e) Sacar el promedio del número de huevos por quiste.

f) Restarle de 10 a 20% del número de huevos que representa el contenido residual en cada quiste.

II. MORFOLOGIA

1. Tipos de esófagos

- Cilindrico Mononchidos

- Dorylaimido Dorylaimus

- Rhabditido Rhabditidos

- Tylenchido sin superposición Tylenchorhynchus

- Tylenchido con superposición ventral Pratylenchus

- Tylenchido con superposición dorsal Radopholus

- Aphelenchido Aphelenchus

- Diplogasterido Hemicycliophora

2. Tipos de cola

- Redonda Hoplolaimus

- Redondeada Pratylenchus

- Cilíndrica Aphelenchus

- Cónica Globodera

- Cónica curvada ventralmente Helicotylenchus

- Atenuada o punteaguda Ditylenchus

- Filiforme Tylenchus

- Clavada Psilenchus

- Mucronada Aphelenchoides Hirschmaniella

- Digitada Xiphinema