- 1 esp<tula

- Tamices de 500u \ 34 mesh, 350u \ 45 mesh, 175u d 80 mesh 100u \ 150 mesh, 50u \ 280 mesh

- 4 beakers (vasos) de 500 \ 250 ml.

1. Coloque 100 ml de suelo en un recipiente o balde (1) con agua (m<s o menos 2 litros). Agite bie con una esp<tula para separar los nematodos de las partRculas del suelo, deje reposar la suspensi\n por 5 segundos para permitir que las partRculas m<s grandes del suelo sedimenten.

2. Pase Rntegramente toda la suspensi\n a travJs de un tamiz de 500u sobre el otro recipiente o balde (2). Descarte el suelo que queda en el balde 1 y el material grueso que ha quedado en el tamiz de 500u, porque todos los nem<todos activos han pasado a travJs del tamiz y se encuentran en el recipiente 2.Algunos nematodos muy largos como los Mermithidae y algunos Longidoridae no pasan r<pidamente por lo que es conveniente agitar suavemente dentro del agua los restos que quedaron en el tamiz. Lave el tamiz y el balde 1.

3. Agite la suspensi\n que contiene el recipiente 2 y p<sela lentamente por un tamiz de 350u sobre el recipiente 1. Al suelo que ha quedado en el recipiente 2 agrJguele un poco m<s de agua, agite y pase esta suspensi\n lentamente por el tamiz de 350u sobre el mismo recipiente 2, repita esta operaci\n una tercera vez. Descarte el suelo que qued\ en el recipiente o balde 2 y deje limpio el recipiente.

4. Lo que queda en el tamiz de 350u son los nematodos activos muy grandes como Longidorus y algunos Xiphinema. Para extraerlos enjuage el tamiz con una pisceta y recoja la suspensi\n en un beaker que le llamaremos 1. Esta operaci\n se realiza cada vez que se pasa la suspensi\n del recipiente 2, a travJs del tamiz de 350 u. Deje limpio el tamiz de 350u.

5. Agite la suspensi\n que se colect\ en el recipiente 1 del paso 3, y p<sela lentamente a travJs de un tamiz de 175u sobre el recipiente 2 el mismo ndmero de veces y de la misma manera como en el paso 3. Descarte el suelo que qued\ en el recipiente 1 y deje limpio el recipiente.

6. Lo que queda en el tamiz de 175u son nematodos medianos como por ejemplo.: Helicotylenchus. Para extraerlos, enjuage el tamiz con una pisceta y reciba la suspensi\n en un beaker que le llamaremos 2. Esta operaci\n se realiza cada vez que se pasa la suspensi\n del recipiente 1 sobre el tamiz de 175u. Deje limpio el tamiz de 175u.

7. Agite la suspensi\n que se colect\ en el recipiente 2 del paso 5 y p<sela lentamente a travJs de un tamiz de 100 u, sobre el recipiente 1, de la misma manera y el mismo ndmero de veces como en el paso 3. Descarte el suelo que qeda en el recipiente 2 y deje limpio el recipiente.

8. Lo que queda en el tamiz de 100u son nematodos pequeZos como por ej.: Pratylenchus, para extraerlos enjuague el tamiz con la pizeta y reciba la suspensi\n en un beaker al que llamaremos 3. Esta operaci\n se realiza despuJs que se pasa la suspensi\n del recipiente 2 sobre el tamiz de 100 u. Deje limpio el tamiz de 100 u.

9. La suspensi\n que se recibi\ en el recipiente 1 del paso 7 se agita y pasa lentamente a travJs de un tamiz de 50 u, el mismo ndmero de veces y de la misma manera como en el paso 3. La suspensi\n que pasa por el tamiz y el recipiente 1 se descarta. Deje limpio el recipiente.

10. Lo que queda en el tamiz de 50u son los nematodos m<s pequeZos y juveniles; para extraerlos enjuage el tamiz con una piseta y reciba la suspensi\n en un beaker que llamaremos 4. Deje limpio el tamiz de 50 u.

11. Los nematodos que se encuentran en los beakers 1, 2, 3 y 4 se observan directamente pero si las suspensiones contienen muchas partRculas de suelo y est<n turbias, se pueden colocar en embudos de Baerman o filtros de algod\n para clarificar las suspensiones.

- Embudos de vidrio de 100 ml de di<metro

- Soluci\n de azul de metileno (4 ppm) para preservar los

- Mallas de metal de 90 mm de di<metro

1. Coloque 100 cc de suelo, en el recipiente o balde y agregue aproximadamente 2 litros de agua. Agite co una esp<tula, para separar y suspender los nematodos y partRculas de suelo, deje reposar la suspensi\n por 5 segundos. Esto permite que las partRculas m<s grandes de suelo sedimenten.

2. Coloque el tamiz de 500 u sobre el tamiz de 50 u y a travJs de ellos haga pasar lentamente la suspensi\n del recipiente o balde para que las partRculas de tierra se vayan depositando en las paredes del balde. Agregue nuevamente 2 litros de agua al suelo que queda en el balde, deje reposar 5 segundos y pase esta suspensi\n por los tamices. Agregue por tercera vez 2 litros de agua al suelo que qued\ en el balde, deje reposar 5 segundos y pase esta suspensi\n por los tamices.

3. Descarte el material grueso que qued\ en el tamiz de 500u. Los ne-matodos y las partRculas de suelo m<s pequeZas quedan en el tamiz de 50 u. Concentre los nematodos en un solo lado del tamiz para facilitar su traslado al embudo. Deje limpio el tamiz de 500 u.

4. Prepare el embudo, conectando a su cuello, la manguerita de jebe y col\quelo sobre el soporte de madera o metal. Cierre la manguerita con un clip y llene el embudo con la soluci\n de azul de metileno, hasta un poco m<s de la mitad del embudo. Coloque la malla de metal y papel filtro o facial en la parte superior del embudo.

5. Con una piseta conteniendo la soluci\n de azul de metileno,enjuague el tamiz de 50 u sobre el embudo, trasladando los nematodos y las partRculas de suelo, que quedan sobre el papel filtro y la malla de metal. Agregue suficiente soluci\n de azul de metileno al embudo para que cubra con una ligera capa, la suspensi\n que contiene los nematodos. Deje limpio el tamiz de 50 u. Los nematodos por movimiento propio atravezar<n el papel filtro y la malla de metal, luego sedimentar<n hacia la parte inferior del embudo. Las partRculas de suelo quedar<n retenidas en el papel filtro. Debe evitarse que los bordes del papel sobrepasen el di<metro del embudo.

6. Al cabo de 24 o 48 horas, abra el clip y colecte 50 ml de la suspensi\n con los nematodos. En una placa de siracusa observe bajo el microscopio de disecci\n, los nematodos colectados.

4. DiseZos cuticulares

1. Observar el efecto del cultivo de clones de papa de hospedantes eficientes y no eficientes en la reproducci\n de Globodera pallida.

- TubJrculos de papa brotados de los clones en estudio

- Suelo estJril

N1 de repeticiones por tratamiento = 3

N1 total de macetas = 12

1. Cortar porciones de tubJrculos conteniendo un solo brote,usando un cuchillo o sacabrotes desinfectado con clorox. Dejar secar las porciones de tub@rculos durante 24 horas.

2. Determinar la viabilidad infectiva de los quistes mediante la prueba de eclosi\n de huevos en exudado radicular o estimando el ndmero promedio de huevos por quiste y rest<ndole un 30% que es aproximadamente el contenido residual. Estimar asR el ndmero de quistes que se tienen que inocular/maceta.

3. Sembrar los trozos de tubérculos en las macetas conteniendo la mezcla de suelo hasta un poco m<s de la mitad de la maceta, inocular los quistes alrededor del trozo del tubJrculo. Cubrir con suelo hasta cerca del borde de la maceta y regar suavemente.

4. A las 10 semanas despuJs de la inoculaci\n se evaluan las hembras adheridas al bolo radicular.